Buffer de transferencia western blot

Composición del tampón de transferencia

Nuestro protocolo de western blot incluye soluciones y reactivos, procedimientos y enlaces útiles para guiarle en su experimento.Revisado el 14 de diciembre de 2020El western blot es una técnica que utiliza anticuerpos específicos para identificar proteínas que han sido separadas en función de su tamaño mediante electroforesis en gel. El inmunoensayo utiliza una membrana de nitrocelulosa o PVDF (fluoruro de polivinilideno). El gel se coloca junto a la membrana y la aplicación de una corriente eléctrica induce a las proteínas a migrar del gel a la membrana. A continuación, la membrana puede procesarse con anticuerpos específicos para la diana de interés y visualizarse utilizando anticuerpos secundarios y reactivos de detección.ContenidoVea nuestro vídeo de protocolo de western blot a continuación.

Si desea ver otros protocolos en vídeo, visite nuestra biblioteca de protocolos en vídeo aquí.>> Imprima el protocolo completo de western blot>> Vea nuestro diagrama de protocolo de western blotSi desea mejorar sus habilidades en el análisis de western blot, consulte nuestra formación gratuita en western blot a petición.

Metanol en tampón de transferencia

Tampón de transferencia para Western BlotVer Navegación’Transferencia de proteínas para Western BlotLos tampónes de transferencia premezclados son una manera conveniente de asegurar una transferencia de gel de alta calidad y consistente. Ofrecemos tampones de transferencia de Western Blot premezclados que están optimizados para cada química de gel. Utilice las pestañas siguientes para ver los tampones de transferencia recomendados y las condiciones de transferencia para la química del gel que se utiliza para la transferencia western blot húmeda o semiseca. Encuentre las recetas de tampón de transferencia sugeridas para la transferencia en húmedo a continuación.Membranas de transferencia Sistemas de transferencia

Tipo de gelTampón de transferenciaTodas las químicas de gelTampón de transferencia de 1 paso de Pierce (5X)Tampón de transferencia de 1 paso de Pierce (1X)El tampón de transferencia de 1 paso es una formulación de alta fuerza iónica que permite una transferencia de proteínas de 5 a 12 minutos cuando se utiliza con sistemas de blotting semisecos compatibles. El tampón de transferencia de 1 paso es compatible con el Power Blotter y otros dispositivos de transferencia semiseca de proteínas, cuando se combinan con una fuente de alimentación de alta corriente adecuada. Estos dispositivos deben proporcionar una corriente alta y constante (de 1,3 a 5,0 amperios) para transferir rápidamente las proteínas a través de las condiciones de alta fuerza iónica suministradas por el tampón de transferencia.Condiciones de transferencia utilizando el sistema Power Blotter

Tampón de transferencia tris-glicina

La transferencia de proteínas del gel a un soporte sólido es un paso crítico en el western blotting. Aunque es un proceso sencillo, se requiere cierto grado de optimización, dependiendo del tamaño de su proteína y de la química de sus geles. A continuación ofrecemos algunos consejos para una transferencia eficaz de las proteínas de los geles a las membranas.

El primer paso es comprender los diferentes métodos de transferencia y cuál sería el óptimo para su proteína. La transferencia húmeda, en la que el sándwich de membrana se sumerge completamente en el tampón de transferencia en un tanque de tampón, se utiliza para transferir proteínas de amplio peso molecular. En el método semiseco de transferencia, el tampón se limita a las dos pilas de papel de filtro que cubren la membrana. Las condiciones semisecas son favorables para transferir proteínas en el rango de 30-120 kD. Un tercer método, la transferencia rápida semiseca, tiene formulaciones especiales de tampón y material que facilitan la transferencia de proteínas en un tiempo tan corto como en 3-10 minutos. El método semiseco rápido puede utilizarse para proteínas con una amplia gama de pesos moleculares.

Receta de tampón de transferencia de western blot

” Nos sorprendió gratamente ver que con FLASHBlot observamos los mismos niveles de transferencia a 25 min que con el protocolo de transferencia más largo… incluso para la proteína de 300 kDa. Este reactivo acortará considerablemente nuestro tiempo experimental. ” – Profesor adjunto, UCSF

En comparación con los tampones de transferencia húmedos tradicionales, el tampón de transferencia FLASHBlot proporciona una mayor eficacia de transferencia de todas las proteínas, incluidas las de alto peso molecular para las que suele ser muy difícil lograr una transferencia completa.

Transferencia completa en menos de 20 minutos.  Se comparó la transferencia de las proteínas CEA (de alto peso molecular) y GAPDH (de bajo peso molecular) utilizando los tampones de transferencia FLASHBlot y Towbin. Tras el análisis de Western blot, los datos muestran una transferencia de proteínas equivalente en 15 minutos con FLASHBlot frente a 60 minutos con el tampón Towbin.

Transferencias más eficaces con el tampón FLASHBlot.  Después de 20 minutos de transferencia, el análisis de Western blot muestra que tanto el CEA como el GAPDH se transfieren más eficientemente utilizando el tampón FLASHBlot que el tampón Towbin.

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